西汉姆联2019中国行:胶原酶的使用

胶原酶的分类:
胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞,用于哺乳动细胞的分离。
2、胶原酶Ⅱ适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织。
3、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
4、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离,将结缔组织分离成单个细胞。

胶原酶的使用:
将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm3左右小块。
将组织块放入离心管(三角烧瓶)中加入30~50倍体积的胶原酶溶液,旋紧盖子(密封烧瓶)。
将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内,每隔3min振摇一次,如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。消化时间与组织的类别很有关系,对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织,消化时间4~48h, 对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min,也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状,一经摇动即成细胞团或单个细胞,可以认为已消化充分。上皮组织经胶原酶消化后,由于上皮细胞对此酶有耐受性,可能仍有一些细胞团未完全分散,但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生 长,因此,如无特殊需要可以不必再进一步处理。
收集消化液(有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤),离心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次,去除上清,加培养液制成细胞悬液,接种培养瓶。

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