西汉姆联对布莱顿:汇百试剂:有关TTC染色原理的介绍


TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞,用来表示细胞的活力。配制多为2%,染色要避光,37度条件下,它是评价脑缺血损伤常用的指标。
 
TTC染色原理(西汉姆联对莱斯特城):
TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物,1894年首次合成用来检测种子的生存能力,1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。
 
ttc可以被活细胞中的具有还原活性的酶(好像主要是琥珀酸脱氢酶)还原生成粉红色的还原产物,所以活组织部分呈现粉红色,而死亡的细胞的还原酶的活力已经消失,因此ttc不能被还原,所以死亡的组织呈现白色。
 
对于种子或者植物组织来说,染色结果为活组织被染成不同程度的红色,死组织或者无生命力的组织不着色。对于缺血梗塞组织,因组织坏死脱氢酶活力丧失呈现苍白色,而正常组织呈深红色。TTC常用的染色浓度为2%(w/v),也可根据组织类型做浓度的适当调整。
 
TTC染色步骤(西汉姆联对莱斯特城):
1、取脑:可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定,所以较软,取脑时更应仔细,保持大脑的完整性。
2、-20度冰箱中速冻20分钟左右,便于切片。
3、切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处;第二刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积的话,应切得均匀或用专门的脑槽。
4、将切片置于TTC中,常规浓度为2%,也有用1%或更低浓度的。
5、用锡箔纸盖住后,放入37C温箱15~30min,不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。
6、染色后效果:为皮层下梗死。
TTC染液是一种脂溶性光敏感复合物,即可用来检测种子的生存能力,也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂,活细胞内的脱氢酶(尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶)可以将TTC还原为红色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。
 
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